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Pfu PCR MasterMix(5×1mL)

Pfu PCR MasterMix(5×1mL)

为高保真性提出的解决方案
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目录号:PPM-5

 

产品概述

Pfu DNA聚合酶是我们为满足对保真性有较高需求的实验(如要求高保真的长片段扩增)所提出的解决方案。

本产品包含Pfu DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液,浓度为2×。其中Pfu DNA聚合酶是一种耐热性DNA聚合酶,分子量90KD,催化5'→3'DNA合成。DNA聚合时的延伸速度为600bp/min,最佳温度为65-75℃,dNTPs的工作浓度为100-300µM,最佳Mg2+浓度为2-3mM,最佳pH为8.1-9.1。

Pfu DNA聚合酶具有独特的3'→5'外切核酸酶活性,能修正错配碱基,从而保证DNA扩增的高保真度,无5'→3'外切核酸酶活性。Pfu DNA聚合酶扩增质粒模板可达10kb,扩增基因组模板可达6kb,尤其适用于长度2kb DNA的高保真扩增,使用方法同Taq DNA聚合酶。DNA扩增(PCR)时,20µl反应体系需1-1.5unit,50µl反应体系需2-3units。

使用预先配制的2× Pfu PCR MasterMix,只需加入引物和模板即可进行扩增,减少了移液操作,最大限度提高了通量和结果的重现性。扩增产物为平整末端不带A,纯化后可直接用平末端载体克隆。绿色的染料在1%的琼脂糖凝胶中与3-5kb DNA片段的迁移率相同,黄色的染料在1%的琼脂糖凝胶中比引物迁移得快(<50bp)。

 

使用说明

1.冰浴中彻底融化2×MasterMix,混匀后短暂离心。

2.我们强烈建议客户购买本产品后分装成小份避免反复冻融。

3.以50μl反应体系为例,按照下表在0.2ml PCR管中加入下列成分:

4. 短暂离心将反应液收集到管底。

5. 若基因扩增仪不防蒸发,请加1-2滴石蜡油。

6. 在PCR仪上执行以下程序(仅供参考):

注:在实际操作中需根据模板的结构、扩增片段的大小和引物的长短等具体情况,设定最佳的反应条件(温度、时间等)。

 

 

仅用于研究,不用于治疗人类或动物

 

使用赛百盛产品所发表的期刊                                                                     使用赛百盛产品的大学与机构

 

 

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