CRISPRclean Stranded Total RNA Prep with rRNA Depletion
(Human, Mouse, Rat)
特异性、无偏性的rRNA去除和RNA-Seq的文库制备
90%
的总RNA是来自于过多的核糖体RNA
98%
链特异性
1
天工作流程
RNA样本中常常含有高达90%的核糖体RNA。如果在转录组测序中不去除这些过度丰富的rRNA序列,会降低测序容量,使检测低表达但在生物学上具有重要意义的转录本更加困难。了解如何使用CRISPRclean有效去除rRNA序列,从而提高您的研究效果
优势
利用CRISPR-Cas9介导的技术,在单个管中可以有效去除多个物种的rRNA
提高对低表达但在生物学上具有重要意义的转录本的检测灵敏度
优化的文库制备和去除工作流程可以生成高质量的转录本表达谱
保持全长、均一的转录本覆盖,并获得高复杂性的文库
单日工作流程:7.5小时的检测时间,3小时的实验操作时间
从RNA到测序准备文库的一日工作流程
特异性和无偏性
CRISPRclean Stranded Total RNA Prep with rRNA Depletion 产生极低的文库偏差。ERCC读数计数在去除(纵轴)和未去除文库(横轴)之间高度相关,表明CRISPRclean的rRNA去除方法具有高度特异性、无偏性和准确性。相比之下,Illumina RiboZero Plus去除结合Jumpcode的全长RNA制备方法显示出较低的ERCC读数相关性和更高的偏差。这意味着CRISPRclean方法可以更准确地反映基因表达水平,相较于未去除rRNA的样本。
有效的单管多物种去除
在多种哺乳动物物种中实现超过90%的rRNA去除。使用通用的参考RNA(包括人类、小鼠、大鼠、鸡、牛和狗)评估了在多个物种中进行核糖体RNA去除的性能。
经过优化的文库制备和去除工作流程
CRISPRclean文库的重复性读数计数高度一致。将ERCC控制RNA掺入5 ng UHR RNA输入后,经过去除的文库复制品之间显示出高度相关的序列读数计数。
高质量的人类基因表达谱表示
(左图)5 ng和100 ng UHR RNA输入之间的高度相关的人类基因表达。高度相关的表达意味着CRISPRclean工作流程对核糖体RNA的去除非常特异且稳健,不受输入量的影响。(右图)在5 ng和100 ng UHR RNA输入下,CRISPRclean显示了人类基因表达水平的最小差异。基因水平的计数在Log2比例上绘制(纵轴),并按从低到高的表达在5 ng文库中进行排序。从Log2折叠变化为0的位置可以看出,在一系列的RNA输入量下,人类基因表达的测量值高度相关,差异最小。
一致的全长、均匀的转录本覆盖度
CRISPRclean文库在转录本长度上提供均匀的覆盖度。在每个5 ng、25 ng和100 ng UHR RNA输入的3个重复中,对在CRISPRclean文库中检测到的基因的转录本位置进行分析,这些基因的读数大于10。
增加了对低表达、生物学上相关的转录本的检测灵敏度
使用不同输入量的UHR RNA制备的文库中,通过对32M子抽样的配对末端读数通过滤器(PF)进行基因检测,以10倍覆盖度评估基因数。
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